Векторы аденовирусные

Векторы аденовирусные * вектары адэнавірусныя * adenoviral vectors — генные конструкции на основе аденовирусов, используемые в генной терапии для введения ДНК в покоящиеся клетки. В отличие от ретровирусов В. а. активно инфицируют как делящиеся, так и неделящиеся клетки, обладают большей потенциальной пакующей способностью (ДНК-вставка более 8 т. п. н.), имеют высокий титр — 1012 инфекционных частиц на 1 мл культуральной среды. Они не интегрируются в геном клетки хозяина и не обеспечивают встраивание чужеродной ДНК в геном трансформированной клетки. Многие обычные серотипы аденовирусов являются патогенами человека, инфицирующими верхние дыхательные пути. Интактные аденовирусы используют для целей вакцинации. В результате накопилось большое количество информации, касающейся безопасности этой системы для человека. Их использование перспективно для генокоррекции клеток верхних дыхательных путей, легких и др. органов — мозга, печени, мышц, кожи и пр. Аденовирусы эффективны при доставке аэрозольным способом, что было использовано в первых клинических испытаниях по генотерапии муковисцидоза (см.). В аденовирусные векторы также инсертируют маркерные гены (neo, CAT или 3-галакто зидазный ген p-Ga-l) для того, чтобы идентифицировать трансдуцированные клетки. Для конструирования векторов используют дефектные по репликации аденовирусы, которые получают путем вырезания из вирусной ДНК генов, кодирующих белки (E1a, E1b) — т. н. В. а. второго поколения. В н. вр. создаются В. а. 3-го поколения, в которых помимо генов E1a и E1b удаляют и регуляторный ген E4. Такая конструкция может поддерживаться только в присутствии клеток-помощников (напр., в культуре клеток почек человека). Удаление большого числа аденовирусных генов из векторов часто сопровождается их дестабилизацией. Это один из главных недостатков В. а., т. к. в ряде случаев остающиеся гены, трансдуцированные в клеткимишени, способствуют формированию иммунного ответа. Именно выраженный иммунный ответ при повторных введениях В. а. с инсерцией гена CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator) оказался наиболее серьезным препятствием для успешной генотерапии муковисцидоза. Некоторые аденовирусные белки оказывают цитотоксический эффект на высокоспециализированные клетки человека. Существует опасность их контаминации хелперным реплицирующимся вирусом. Кроме того, аденовирусы редко интегрируются в геномную ДНК и потому экспрессия их генов, как правило, носит временный характер и требует повторных введений вектора. Способность инфицировать практически любые клетки как in vivo, так и in vitro, делает особенно актуальной адресную доставку конструкций и введение в их состав тканеспецифических промоторов (напр., промотор гена x-фетопротеина вводят при необходимости экспрессии гена в клетках печени, промоторы генов сурфактантных белков В и С — для экспрессии чужеродных генов в клетках легких).